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96孔细胞培养板使用与维护方法
以下是关于96孔细胞培养板使用与维护方法的专业指南：
一、细胞接种操作规范
细胞预处理
选择状态良好的细胞(瓶底密度80%为佳)，消化时先用PBS或无血清培养基冲洗
使用0.25%胰酶消化2-3分钟，不同细胞类型需调整时间
终止消化后需吹打成单细胞悬液(建议用培养基稀释而非血清)
接种技巧
每孔加入100μL细胞悬液，从孔左侧底部缓慢加样
加完半板后需重新混匀悬液再继续加样
加样后轻敲培养板四边(顺时针方向敲击3次/边)
二、培养环境控制
边缘效应处理
? 周边孔建议填充PBS或培养基作为缓冲，避免用于关键实验
? 新型培养板(如Nunc Edge)可通过蒸发沟槽设计消除边缘效应
温湿度管理
? 换液时需预温培养基(37℃预热10分钟)防止细胞脱落
? 观察细胞时需注意培养板盖雾气干扰(可短暂静置除雾)
三、日常维护要点
操作环节 注意事项
换液操作 沿孔壁缓慢加液，使用剪尖枪头避免冲力过大
灭菌处理 聚苯乙烯材质耐受γ射线灭菌，但不可高压灭菌(最高耐温80℃)
储存条件 未开封产品需避光干燥存放(15-25℃)，已开封需密封防污染
四、特殊应用提示
成像实验：选择底部光学性能优异的型号(如ibidi μ-Plate折射率1.52)
长期培养：每48小时需更换培养基，避免代谢废物堆积
注：细胞密度建议控制在0.5-2×10?/孔，具体需根据细胞类型调整
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